之前我们有几期文章介绍了使用默克Amicon^® Ultra超滤管的应用场景（分离外泌体、浓缩病毒），有很多老师反馈了一些超滤管使用时的问题，针对其中问的比较多的问题，小编特意进行了收集、整理。今天给大家介绍超滤管的使用过程中，离心力g与RPM的换算及常见问题的解答。

从离心机厂家文件上查阅转子半径，或像以下图示这样自己测量转子半径。

绘制转子半径和建议的RCF（离心力g）图，连线确定RPM。

此列线图实际是通过右侧的公式计算得出的。

A1：Amicon^® Ultra超滤管的膜材质为默克密理博Ultracel^®再生纤维素膜，生产工艺严格，截留分子量明确而精准，蛋白吸附损失最小。

Q2：如果要用超滤的方法分离两种蛋白，那么这两个蛋白的大小需要相差多少？

A2：按照经验，建议两个蛋白的分子量要相差一个数量级（10倍）。

Q3：Amicon^® Ultra超滤管可以用于病毒浓缩么？

A3：可以。对于慢病毒推荐Amicon^® Ultra 100 kDa； 对于腺病毒推荐Amicon^® Ultra 50kDa。具体的操作步骤可以参考病毒浓缩纯化试剂盒FTLV00003和FTAV00003的产品使用说明书。另提供AAV（腺相关病毒）的制备方法供参考。

Q4： Amicon^® Ultrar超滤管可以用酒精消毒灭菌么？

A4：Amicon^® Ultra与70%乙醇是兼容的，但是对灭菌处理的具体方法没有做相关的测试，所以无法提供更进一步的参考信息。建议采用Ultrafree无菌离心管对浓缩后的样品进行过滤除菌。

Q5：Amicon^® Ultra超滤装置是否可以用于高压灭菌？

A5：Amicon^® Ultra都是采用热封设计，不可以用高压高温灭菌。

Q6：Amicon^® Ultra超滤管是否不含RNA酶？

A6：不保证超滤管不含RNA酶，建议用0.1% DEPC在37度浸泡2h，以灭活RNA酶；残留的DEPC可以用Milli-Q^®超纯水洗涤除去。

Q7：用Amicon^® Ultra超滤管去除去污剂是有什么需要注意的吗？

A7：去污剂因其性质，当浓度大于临界微团浓度（Critical Micelle Concentration, CMC）时，去污剂分子会聚集形成微团而改变分子构象，这有可能会影响去污剂的去除效果。

Q8：蛋白在浓缩时出现了沉淀，如何改进？

A8：蛋白如果浓缩过快或者过度浓缩都有可能引起蛋白沉淀。建议蛋白浓缩后的最终浓度不超过20mg/ml。对于对浓缩速度敏感而容易沉淀的蛋白，建议的改进方法是：

Q9：有时候用超滤离心管连水都离不下来，可能是什么原因？

A9： Amicon^® Ultra超滤膜中含有微量甘油。 如果出现这种情况，请先用0.1N NaOH清洗再离心。最后用缓冲液或Milli-Q^®水再次清洗后甩干。清洗后的滤膜应立即使用，如暂时不用，请保持润湿状态，避免重新干燥。

Q10：说明书中推荐在室温下进行离心，考虑到蛋白的稳定性，是否可以在4℃进行离心？
A10：可以，但是低温会增加蛋白样品的粘性，导致流速减慢，建议可将离心时间延长到原来的1.5倍。